丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通

为什么我的细胞提取液中没有检测到目的蛋白?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

user-title

小布丁瑶瑶

为什么我的细胞提取液中没有检测到目的蛋白?

wx-share
分享

4 个回答

user-title

inventbiotech

有帮助

首先要考虑你的目标蛋白,他是在细胞的什么位置表达,是内源表达还是外源表达,丰度如何,外源表达要考虑他是否表达了。就是确认你的蛋白在你的样品里。再考虑蛋白提取的问题,目标蛋白没检测到,可能是蛋白提取时没提取到,这样就肯定检测不到了,你的目标蛋白如果是内源的,估计丰度不高,还可能不定位在胞质这些普通蛋白提取方法可以搞定的,可以考虑柱式法总蛋白提取。还有如果是丰度低,可以考虑针对目标蛋白所在亚细胞位置,进行亚细胞结构的分离富集,再行检测。内质网,高尔基,溶酶体,线粒体,内体,细胞核,细胞质膜都可以。

user-title

n0y0j7

有帮助

测提取的蛋白浓度,确保提取的量和上样量,提取时加入蛋白酶抑制剂。

根据分子量选择合适的胶浓度和转膜条件。

抗体浓度调整。

文献支持细胞提取液中有目的蛋白。

user-title

whilt-shirt

有帮助

有可能是抗体原因,建议增加上样量或者一抗稀释浓度试试

user-title

天一湖医者

有帮助

原因有很多:

a) 你的细胞中不表达这种蛋白质,换一种细胞;

b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了,你必需加入PMSF,抑制蛋白酶活性;c) 你的抗体不能识别目标蛋白,多看看说明,看是否有问题。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序