inventbiotech
首先要考虑你的目标蛋白,他是在细胞的什么位置表达,是内源表达还是外源表达,丰度如何,外源表达要考虑他是否表达了。就是确认你的蛋白在你的样品里。再考虑蛋白提取的问题,目标蛋白没检测到,可能是蛋白提取时没提取到,这样就肯定检测不到了,你的目标蛋白如果是内源的,估计丰度不高,还可能不定位在胞质这些普通蛋白提取方法可以搞定的,可以考虑柱式法总蛋白提取。还有如果是丰度低,可以考虑针对目标蛋白所在亚细胞位置,进行亚细胞结构的分离富集,再行检测。内质网,高尔基,溶酶体,线粒体,内体,细胞核,细胞质膜都可以。
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测提取的蛋白浓度,确保提取的量和上样量,提取时加入蛋白酶抑制剂。
根据分子量选择合适的胶浓度和转膜条件。
抗体浓度调整。
文献支持细胞提取液中有目的蛋白。
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有可能是抗体原因,建议增加上样量或者一抗稀释浓度试试
天一湖医者
原因有很多:
a) 你的细胞中不表达这种蛋白质,换一种细胞;
b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了,你必需加入PMSF,抑制蛋白酶活性;c) 你的抗体不能识别目标蛋白,多看看说明,看是否有问题。