磷酸化蛋白免疫印记实验

时间长点，一般问题不大，主要是抗体的浓度和特异性可能存在问题。

这个可能是你一抗的抗体特异性不强，所以背景会黑，你试试加大洗膜液中tween20的浓度

感觉是抗体浓度的问题吧。还有你封闭了多久

一般抗体孵育时间短对显影会比较有影响，孵育时间长没多大关系，而且20小时也不算很长时间。