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请问链霉菌中做Coip如何保证蛋白活力？
棋NKKP
链霉菌具有细胞壁，相比于动物细胞来说破碎条件相对复杂，想请教一下有在链霉菌中用标签蛋白做coip或者pulldown的经验吗？
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3 个回答
bamboopiggy
有帮助
做好预实验，尤其是破菌壁时注意低温。可以先按照梯度条件裂了菌，跑个wb看看，然后再进一步做ip
dxy_gwrp7ndq
有帮助
30度培养两天硫链丝菌素诱导过夜，高压破菌仪破菌，可加胰蛋白酶抑制剂(PMSF)，同时全程冰上操作。
府宅
有帮助
采用非离子去垢剂(NP40 或Triton X-100)，不能用高浓度的去垢剂(0.2%SDS)，细胞裂解液中要加各种酶抑制剂
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