为什么WB条带一个位置总是有两条，只敷了一种蛋白？

可能是抗体的特异性不好，也有可能是抗体浓度过高

可能你的蛋白有修饰，但是抗体又能detect到。没事，只要趋势一致，就可以

如果是某一个位置总有两条，那可能是抗体本身就可以识别两个，比如LC3，如果是所有条带都有两条，那可能是曝光问题

出现两条带是经常会发生的情况原因可能是该蛋白出现了同源二聚体，故都可以被抗体识别出来 或者改蛋白有部分降解，但是未降解部分依然可以和抗体结合 另外抗体特异性不高，也会出现非特异性的结合，造成出现两条或者多条带 所

可能是出现了杂带：

①目的蛋白存在多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点等等)，本身可以出现多条带。查文献或生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，去除修蛋白饰后确定蛋白实际大小，这个需要一定的生物化学基础和生信分析能力。

②目的蛋白有其它剪切本，查阅文献或生物信息学分析其可能性。

③样本处理过程中目的蛋白发生降解，加入蛋白酶抑制剂；样本处理在冰上操作。

④上样量过高，过于敏感，适当减少上样量。

⑤一抗特异性不高，重新选择或制备高特异性的抗体。

⑥一抗不纯，纯化抗体。

⑦一抗或者二抗浓度偏高，适当降低抗体浓度。