WB最后条带曝不出来以及背景颜色很黑

背景黑考虑

1.减少蛋白的上样量

2.缩短曝光时间

3.如果是化学发光，请减少超敏液的使用

这是因为你的抗体不好使，没有条带，只能往有微弱光的地方显，所以没有条带，而把背景显出来了。

考虑有以下原因：一抗浓度太高，用个两三次就好了；抗体不好（我的可以排除抗体不好）；封闭不完全，时间不够；洗脱时间次数不够。我当时的原因是一抗浓度太高。

有可能是转膜没转好，也有可能是封闭不完全