府宅
当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。假如细胞内存在XY蛋白复合物,用X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也被沉淀下来。沉淀经多次洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸后离心收集上清,对上清进行免疫印迹(Westernblot,WB)检测Y蛋白的存在,如果Y出现,则说明蛋白X与蛋白Y存在相互作用,CO-IP实验成功。
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在coIP-WB鉴定结果中,IgG组无目的蛋白条带、IP组有目的蛋白条带,说明IP过程成功;银染胶图中,IP组相对于IgG组有更多蛋白条带、且存在差异,说明coIP过程捕获到互作蛋白;IP产物在质谱检测中鉴定到的蛋白数量不能作为判断实验成败的标准,因为这取决于目的蛋白本身所具有的互作蛋白数量、结合力强弱等方面;IP产物的质谱鉴定数量越多并不代表结果越好。
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Input有目的条带,阴性对照无目的条带,互作组有目的条带说明Co-IP成功。
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