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大蛋白先试试marker能转上吗,如果能应该没问题,如果不能适当在此基础上延长转膜时间;蛋白的上样量也可以加大吧,可以试试。
迟C迟
如果总蛋白没做出来,那最大的可能是转膜没有转好。不知道你有没有预染marker上有200多kd条带的那种,可以辅助你鉴定转膜效率。转膜完以后还要再染下胶,看看大分子量的蛋白有没有转过去。做这样的蛋白,胶浓度不能大,一般8%左右最好。
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使用低浓度的胶,增加转膜电流和时间
天一湖医者
电泳电压不能太高,否则蛋白会受热变性.电泳时间不能太长,所以电泳液最好经常换新的,保证两个小时左右跑完!
txs900416
一般采用:1.半干转可以缩短转膜时间和促进转膜效率;2.若无相应转膜仪,可加大转膜电流和延长转膜时间,需要注意的是维持转膜液低温状态,可转膜每半小时换预冷好的转膜液即可
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蛋白大约300KD 6%胶 ,湿转:0.2PVDF膜 甲醇浸润5s ,转膜液:10%甲醇 + 0.1%SDS , 转膜条件:30v 4° 过夜转20h 左右,结果不错
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