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丁香通

做WB曝光后目的蛋白位置出现2个相邻条带,但是抗体说明书上没有提过会有2条带情况,原因可能是什么呢?

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养点鱼吃火锅

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6 个回答

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bamboopiggy

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1.你的目的蛋白,可能经过修饰了,例如磷酸化,糖基化等。2.胶灌的不匀,runing buffer出问题了。3,转膜的夹子出现问题,转膜没转好,4.如果用胶片,可能时曝光过程中,手移位了。

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whilt-shirt

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有可能是抗体本身原因,我们实验室经常会。出现这种情况,说明书也不是完全正确

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邓豆豆逗

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可以先看一下抗体官网的一些效果图,是否做出来有两条带的现象,其次查一下相关文献,看这个蛋白是否有剪切体或一些修饰之类的,还有可能是蛋白降解了,这时候可以找一个阳性对照一起做,如果阳性对照是单条带,就考虑是样本的原因了

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txs900416

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避免操作问题后,有可能多个原因:1、抗体特异性不好;2、目的蛋白发生了修饰分子量发生了改变

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dxywode

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比如构建3a和3b的克隆,不能带HA、flag等tag。转染细胞之后一起跑胶比对位置
或者针对3a和3b的公共序列设计干扰片段,转染细胞。两条带应该都下降
再针对3a或者3b不同的地方设计干扰片段,转染细胞。应该就只有一条带下降。
或者找只识别其中一个变体的抗体,或者定制。

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bqejjh123

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我觉得上边的带肯定是条带,因为你的曝光太强了,如果曝光再弱一些,它就是一条细细的带了,上边的带应该是你的目的蛋白,因为第一过表达蛋白一般会比较强,第二右边的样品里没有上侧条带,下面的带可能是杂带。

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