医者成真
探针缓冲液的组分是否决定于被标记的蛋白质。通常缓冲液中应含有盐、去污剂和 BSA。以尽可能地避免非特异性反应的发生。另外,缓冲液中应含有还原剂、金属离子或所需的其他因子。一开始,建议使用含有 0.1% Tween-20(体积分数)和 0.O1mg/ml BSA 的 PBS(pH7.5)。被标记蛋白的最佳浓度,因不同的实验而各不相同。开始时可先采用 1ug/ml,这对约 50kDa 的蛋白质来说相当于 20nmol/L。所用缓冲液的体积由哪些方面而定?
所用缓冲液的体积由具体实验而定
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只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算盐和酸的量。总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量
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缓冲容量的大小与缓冲溶液的总浓度和缓冲比有关。任何缓冲溶液的缓冲能力都是有一定限度的。如果加入的强酸和强碱超过某一定量时 ,缓冲溶液的p H 将发生较大的变化,从而失去缓冲能力。
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您自己已经回答了:通常缓冲液中应含有盐、去污剂等。被标记蛋白的最佳浓度,因不同的实验而各不相同。所用缓冲液的体积由具体实验而定。