SDS-PAGE电泳实验相关问题？

1.缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。

2.避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。

3.加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。

1.低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。

2.靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。

3.蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。

4.电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。

样品浓度和量够的情况下，选择合适的电泳电流或电压，如果是小分子目的蛋白，可调整浓缩胶和分离胶的比例，加长预电泳时长

是不是胶没凝好？考虑一下延长一下凝胶时间，30min试试，大概中间有折射线时候再倒，然后再用吸水纸擦擦