BCA测蛋白浓度相关问题

相关实验：蛋白质的表达、分离、纯化实验

丁香实验

2022-01-12

测蛋白浓度时发现，标曲挺好的，但是稀释倍数不同，算出来的原始浓度有比较大的差别，这是什么原因呢？

20 个回答

隔壁家的小夜猫子

2022-01-21

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确定你每个点都在标曲信任范围内么，另外稀释的时候取液太小不容易取准，建议梯度稀释。

JCorona

2022-01-21

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可能的原因：1.操作的问题，稀释不准确；2.稀释后测得浓度是否落在标准曲线内？不在标准曲线内的结果不具有参考价值；3.是否严格控制每次的反应时间？

随心-丁香园

2022-01-21

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1.要看蛋白浓度在不在标准曲线线性范围内。蛋白浓度过高或者过低，超出或者接近标准曲线上限和下限其实都不准确。 2.蛋白质在测定过程中是否在冰上操作，防止降解，提取时是否加入蛋白酶，磷酸酶抑制剂？

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2022-01-21

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用标曲去测蛋白浓度时，人为可能会造成误差，像是你的移液器，你的枪头等，所以如果想准确的测蛋白浓度可以使用仪器自动定量，会更准确一点

红格子一号

2022-01-21

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没有混匀，或者不在置信区间内，只在一定范围呈线性

一支肾上腺素

2022-01-21

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不管何种方法测定蛋白浓度的准确性都依赖于待测蛋白的浓度，只有在一定范围内才处在线性范围内，浓度太低或太高时，测定值都会有偏差。

dxy_h7vcp8v3

2022-01-21

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BCA蛋白浓度测定的方法，是在一定浓度范围里检测相应蛋白浓度的。超过检测范围，浓度会测得不准，建议吧目的蛋白稀释至标准曲线中间位置测，这时测得的蛋白浓缩会准确一点。其次，还可以采用Nanodrop检测蛋白浓度。最后，如果蛋白浓度相差不大不影响后续实验的话，没必要纠结其中。。

ZZDX-YILILI

2022-01-21

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1.标准曲线R2很准确，看下你的稀释倍数，确定下稀释后是不是在标准曲线范围内。 2.是购买的标准品还是自己配置的BSA，如果是购买的试剂盒里面带的话，测定不准确有可能是反应时间和温度有关。如果是自己配置的标准品，确定你自己配置的标准品是否准确。

dxy_bq4uxnd

2022-01-21

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稀释的过程操作足够规范吗？如果操作不规范，那么误差就是操作引起的，如果对操作自信，觉得操作没有问题，那么误差可能是因为蛋白质样品混合不够均匀。

jey1235

2022-01-21

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bca有最佳测量范围，标曲的两头都是算出来的。样品稀释到中间位置可以当作准确测量。过量稀释来返回来继续检测标曲准确度将毫无意义，不然怎么不用你的样品去做标准样呢！

dxy_pni5ki46

2022-01-21

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稀释的操作本身也有误差，如果做了很大倍数的稀释换算回去的话一点点误差也会放大很多，但整体的趋势应该不会差太多，而且实际上bca也不算是准确定量，所以看看大致趋势的结果就好

dxy_pggo2lp2

2022-01-21

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1.BCA定量是有量程范围的，测出来的结果应在0.5mg/ml以内才是可信的。2.不知道你说的稀释倍数不同是啥意思，是指不同样品之间的稀释倍数不同吗？如果是这样，浓度有差异难道不是正常的吗？如果没有差异那还需要定量吗？如果是同一样品稀释不同倍数得出来的浓度差异过大，要考虑量程的问题，还有在上样的时候是否充分混匀，建议做复孔。