20 个回答
隔壁家的小夜猫子
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确定你每个点都在标曲信任范围内么，另外稀释的时候取液太小不容易取准，建议梯度稀释。
JCorona
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可能的原因：1.操作的问题，稀释不准确；2.稀释后测得浓度是否落在标准曲线内？不在标准曲线内的结果不具有参考价值；3.是否严格控制每次的反应时间？
随心-丁香园
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1.要看蛋白浓度在不在标准曲线线性范围内。蛋白浓度过高或者过低，超出或者接近标准曲线上限和下限其实都不准确。
2.蛋白质在测定过程中是否在冰上操作，防止降解，提取时是否加入蛋白酶，磷酸酶抑制剂？
此用户已注销
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用标曲去测蛋白浓度时，人为可能会造成误差，像是你的移液器，你的枪头等，所以如果想准确的测蛋白浓度可以使用仪器自动定量，会更准确一点
红格子一号
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没有混匀，或者不在置信区间内，只在一定范围呈线性
一支肾上腺素
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不管何种方法测定蛋白浓度的准确性都依赖于待测蛋白的浓度，只有在一定范围内才处在线性范围内，浓度太低或太高时，测定值都会有偏差。
dxy_h7vcp8v3
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BCA蛋白浓度测定的方法，是在一定浓度范围里检测相应蛋白浓度的。超过检测范围，浓度会测得不准，建议吧目的蛋白稀释至标准曲线中间位置测，这时测得的蛋白浓缩会准确一点。其次，还可以采用Nanodrop检测蛋白浓度。最后，如果蛋白浓度相差不大不影响后续实验的话，没必要纠结其中。。
ZZDX-YILILI
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1.标准曲线R2很准确，看下你的稀释倍数，确定下稀释后是不是在标准曲线范围内。
2.是购买的标准品还是自己配置的BSA，如果是购买的试剂盒里面带的话，测定不准确有可能是反应时间和温度有关。如果是自己配置的标准品，确定你自己配置的标准品是否准确。
dxy_bq4uxnd
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稀释的过程操作足够规范吗？如果操作不规范，那么误差就是操作引起的，如果对操作自信，觉得操作没有问题，那么误差可能是因为蛋白质样品混合不够均匀。
jey1235
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bca有最佳测量范围，标曲的两头都是算出来的。样品稀释到中间位置可以当作准确测量。过量稀释来返回来继续检测标曲准确度将毫无意义，不然怎么不用你的样品去做标准样呢！
dxy_pni5ki46
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稀释的操作本身也有误差，如果做了很大倍数的稀释换算回去的话一点点误差也会放大很多，但整体的趋势应该不会差太多，而且实际上bca也不算是准确定量，所以看看大致趋势的结果就好
dxy_pggo2lp2
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1.BCA定量是有量程范围的，测出来的结果应在0.5mg/ml以内才是可信的。2.不知道你说的稀释倍数不同是啥意思，是指不同样品之间的稀释倍数不同吗？如果是这样，浓度有差异难道不是正常的吗？如果没有差异那还需要定量吗？如果是同一样品稀释不同倍数得出来的浓度差异过大，要考虑量程的问题，还有在上样的时候是否充分混匀，建议做复孔。
dxy_4uyyu09r
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很正常啊，同一批样品不会存在太大稀释倍数的差异，稀释浓度不同的确影响测量准确性，如果实在是不同样本的内参有差异，根据实际结果调整上样量就行了。
小白野蛮成长
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原始浓度有差别不是很正常吗 再加RIPA和lodding配平就好了
Guoood
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BCA法测定浓度有一定范围，超过2000多n g /ul 可以使用外延计算浓度。有时蛋白浓度过高也会用水稀释一下蛋白，具体做法是蛋白量减半，另一半加水补齐，最后测定的浓度✖️2即可。不用特意稀释多少倍。
z流沙z
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浓度太高可能已经超过标曲和仪器的最佳测试范围了，吸光度最好1-3
飞天幻雪
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差别多少？没必要稀释不同的倍数啊，你可能混的不够匀，另外同一批样品尽量不要稀释不同的倍数，这样最后跑定量的时候也容易内参不齐，还需要再次调整上样量。与其这样不如准备细胞的时候就尽可能保证相差不大，另外裂解的时候尽量条件一致，这样可以一次跑出比较好的内参，目的基因也更准确
bamboopiggy
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最好测出来的数值在你标准曲线的中间最合适，越往两边差异越大。你别要求数值一样，只要相对数值一样，可以上样就可以
verbalkint
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有可能稀释的不是特别准，另外bca也不是非常精确，横向比较就行了，如果要跑稀释后的样品，不放心的话可以稀释后再测一次bca，看齐不齐
vae1476
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稀释倍数太大或太小，会导致计算的时候，在标曲线性范围比较偏的地方，就会不太准，要选择标曲中间段的浓度
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