滤器相关问题

1.滤器高压消毒时滤膜变小，为什么

丁香园网友dongwp的观点为：旋紧压住膜后高压灭菌就可以了，醋酸纤维膜会收缩，尼龙膜会好点。

2.滤膜破了，真空泵惹得祸？

丁香园网友worm27的观点为：

防细菌滤膜的网孔的直径为0.45微米以下，当溶液通过滤液后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻，在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置；液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤膜装在注射器的靠针管处，将待过滤的液体装入注射器，推压注射器活塞杆，溶液压出滤膜，从针管压出的溶液就是无菌溶液。

过滤除菌操作步骤：首先将过滤器、接液瓶用纸包好，滤膜可放在培养皿内用纸包好。使用前先经121℃高压蒸汽灭菌30分钟；在超净工作台上，将滤器装置装好，用灭菌无齿镊子将滤膜安放在隔板上，滤膜粗糙面向上；然后将待除菌的液体注入滤器内，开动真空泵即可过滤除菌。滤液经培养证明无菌生长后可保存备用。

一定要采用质量好的膜，滤纸一定要安装平整，滤纸四周受的张力要均匀，不能有褶皱，你可以一次过滤500ml，免得压力太大，同时负压吸力不要开太大，我以前用的是象呼吸科用的呼吸器，手工挤压

丁香园网友solo_wjq的观点为：

安装:

0.22um放下面,上面放0.45um,光面向上,(不过没感觉光面向上或者向下有什么不同的结果).安装滤器的时候旋钮不要过紧,对角方向逐渐加压.如过紧高温膨胀可能会损坏滤膜.

高压:

高压之前要使滤膜湿润,可从进液口滴如少许超纯水,高压之后不可放入烤箱干燥.

过滤:

过滤之前一定要把旋钮拧紧,对角方向逐渐加压.每次放入滤器中的液体不要超过收集瓶的容积,否则液体流下过快而来不及更换瓶子会溢出.压力泵一般没有可调节的,所以需要一个人看着压力泵,压力超过0.2mPa的时候立即切断电源,压力下来的时候在给电.

3.过滤DMSO用什么材料的滤膜

丁香园网友eeflying的观点为：无水纯DMSO本身就是溶菌剂，DMSO溶解细菌和溶解尼龙是一个道理，必有一端能用，无水的，能溶尼龙的就无菌，有水的，除菌的过膜没问题。

丁香园网友ylcui的观点为：只能用尼龙滤膜或改性纤维素膜的滤器，康宁公司和密理博公司都有相应的型号，价格是14-16元/个。可以一次过滤50ml，储存在无菌容器中备用，

另外，取用DMSO时，不可使用一次性注射器，因为其中的活塞是橡胶制成，可被DMSO溶胀。一定要使用玻璃注射器，或者使用移液器吸取。

另外，SIGMA公司和其他公司的细胞培养专用DMSO，是经过除菌的，可以直接使用。

丁香园网友jjyyll的观点为：一般细胞培养的用液均需要无菌处理，DMSO或者无水乙醇或水溶解后加入培养的细胞用液更需要如此，不过DMSO是有机溶剂用一般的针头滤器就会将滤膜融解，如：要过滤DMSO溶解的DTZ，需要使用耐DMSO的Nylon材料滤膜（摘自生物谷）但如果是只作简单的验证或测量鉴定，也可以考虑不过滤而直接使用，因为不会大批量的细胞污染，相关资料也可以从生物谷中查找

4.33mm的一次性过滤器（22um）一个能够过滤多少体积的培养液

丁香园网友snowjuan的观点为：可以过滤1L啊！你放一层滤膜，压力不要打的过大，如果放几层滤膜，滤到后来速度很慢，其实只要你从头到尾滤膜没有破，一层滤膜就够了！

5.直径25mm, 滤膜孔径0.22um的一次性针式过滤器如何判断它的好坏?一个滤器最多可过滤多少液体

丁香园网友lijian1005的观点为：推点儿空气，针桶回弹证明没有破坏。我就是这么用的，不过不是一次性的而已。

丁香园网友new_story的观点为：一般只要不破，一个一次性的可以过500ml没问题。

6.怎样检查滤膜是否合格

丁香园网友hkai97的观点为：正规做法是滤前滤后都做完整性试验。简单做法，如果是针头滤器，先用液体将滤膜浸湿，再用注射器向滤器打空气，如果空气不能穿过滤器，滤器就是好的。不要太简单！

丁香园网友烟海沉浮的观点为：

滤前做完整性试验：此法适合针头滤器，如上所述，先用液体将滤膜浸湿，再用注射器向滤器打空气，如果空气不能穿过滤器，滤器就是好的。

像过滤培养液用大滤膜，做上面滤前完整性试验不太可行，只能是肉眼大致观察。因此，做滤后完整性试验显得非常重要，具体做法是：

待过滤完滤液后，将滤器慢慢打开，看其是否有问题如裂缝、小漏洞等。

吸取小量培养液培养，做验菌试验：小量（2-5ml）培养液加到小培养瓶，入孵箱培养，24-48小时不出现浑浊、气泡时，可放心使用。或将取少量培养液做细胞培养，24小时细胞生长良好，说明此培养液没问题，以后放心使用。培养液无问题，说明滤膜合格。而大大减少细胞培养时的污染。

7.塑料滤器的滤膜好象装反了,会不会影响滤过的效果

丁香园网友ljksbs的观点为：

滤膜还是有反面和正面说法的，其实就是光滑面和毛面之分，区别在于将滤膜对着阳光看，反光的一面为光滑面，粗糙的一面是毛面，装时最好是将毛面向上，光滑面向下。victoh主任说得有道理，因为滤膜有时由于高压时容易破裂，所以，为了减少滤膜高压时破裂的机率，在用之前用蒸馏水将滤膜润湿，使之变韧，以减少高压压力造成滤膜破裂的机率，但是注意润湿之前，要区分好光面和毛面，因为滤膜用水润湿后，就无法区分光面和毛面。

至于用时滤膜破没破，就看阻力了，没有阻力肯定是破了，但是注意用时不要来回抽率，这样容易导致滤膜破裂，个人认为最好每次滤之前，多高压几个滤器，以备万一！

8.滤器滤菌可信么

丁香园网友ljksbs的观点为：

用滤器除菌，如果滤器经过严格高压灭菌而且自己做时严格无菌操作的话，是可以做到除菌目的的！

你的情况我也出现过，在用滤器出现染菌的原因，个人感觉可能有以下几点以下几点：

（1）所用的滤器一定要高压灭菌，在高压灭菌后，滤器一定要烤干后方可使用！

（2）滤器的滤膜用之前先用水浸泡一下，然后装滤膜，这样可以使滤膜变韧，可以减少高压过程中滤膜破裂！

（3）最后，操作过程注意无菌操作！

丁香园网友wenyang76的观点为：关于滤器，本人觉得在用水蘸湿高压后最好不要放在60摄氏度以上烤干，而是放在外面自然慢慢干燥。因为湿的滤膜迅速烤干很容易干裂，造成漏液。自然干燥虽然不能保证百分之百的安全，但是比迅速烤干干裂的纪律要小的多。

丁香园网友Kochfan的观点为：

如果需过滤的液体量不是太多，最好购买一次性滤器（0.22μm，价格也不贵，进口的月20-30元，使用时一端与一次性注射器相联，下接无菌的容器。注射器内加入你所需要过滤的溶液，轻推真栓即可。最好在无菌罩内进行，非常简单方便，效果也不错。

检验过滤效果一般是以粘质沙雷菌为参照，因为其被认为是目前已知的最小的细菌。该菌很易得，方法也很简单，将该菌稀释后用滤器过滤，将过滤液接种平板，观察有无细菌生长。