蛋白切割PH调节相关问题

丁香实验

2022-01-12

最近在做小分子量蛋白纯化，使用gst和his标签链接在蛋白两侧，gst纯化后使用甲酸溴化氰切割gst标签，混合液冻干后，希望使用his再次纯化，可是纯化效果不佳，估计是切割过程中ph影响his标签结合柱子。请问各位蛋白溶液ph调节一般如何进行？

15 个回答

一支肾上腺素

2022-01-21

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如果提高溶液的PH值，那么就要在溶液中加入大于这个PH的溶液；如果要降低溶液的PH值，那么可以加入小于这个溶液PH的溶液。在调节溶液PH的过程中，应该随时监测溶液PH的变化。

红格子一号

2022-01-21

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试用透析或者超滤进行buffer置换，用常见缓冲液比如pbs

jey1235

2022-01-21

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兄弟，his tag 的挂ni beads ph低于6效果就大打折扣了。切记切记。其次调整蛋白ph当然是用来透析啊，怎么可以直接调呢！选好buffer 介质 mes hepes tris 很多的。一定不能直接调整。

ZZDX-YILILI

2022-01-21

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1.纯化效果不佳我不知道是纯化下来的浓度低还是咋的哈。首先你的蛋白质带着标签，我建议如果标签相对较小不影响蛋白质功能的话，不去过多去除，因为去除的过程中有可能反而会影响本身的蛋白质活性。 2.his利用镍住进行纯化，如果能确定正常结合上去的话，一般采样合适的洗脱液是能正常洗脱下来的。

dxy_bq4uxnd

2022-01-21

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我们在调节蛋白溶液ph时一般会用tirs-hcl这一种缓冲液进行调节，首先配制所需ph的tris-hcl溶液，使用该溶液调节蛋白溶液ph

verbalkint

2022-01-20

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如果浓度不低，可以直接缓慢的一边rotate一边加hepes或者tris 8.0调ph，如果溶液体积很重要或者浓度很低，可用透析

dxy_h7vcp8v3

2022-01-20

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GST标签切割可以选择 GST切割酶进行标签的切除；其次，关于纯化好的蛋白再次挂柱，建议先用GST标签吧目的蛋白纯化得到。然后，切除GST标签。然后得到的蛋白溶液，用小载量的重力纯化柱进行his标签的挂柱。然后，采用含有咪唑的洗脱buffer洗脱目的蛋白。。如果，非要调节蛋白溶液buffer 建议使用缓冲能力强的Tris盐酸体系进行蛋白纯化。