纯化方法相关问题
丁香实验
纯化蛋白时，需要多种纯化方式，用疏水柱纯化完pH值是8.0，再用阳离子柱纯化，pH值变为4.9,透析换液，沉下来很多目的蛋白，请问如何避免，少沉点目的蛋白？
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24 个回答
一支肾上腺素
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一定要记住56℃30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。如果温度过高，时间过久或摇晃不均匀都会导致沉淀物的增多。
JCorona
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阳离子会吸附阴离子，而氢氧根是阴离子根，氢氧根被吸附，而氢离子被留下，导致ph值降低。ph改变很可能破坏了你的目的蛋白的离子层和水化膜，导致蛋白聚集沉淀。清楚了原因，我们再来看解决办法，可以从两方面入手。其一，减少阳离子柱的填料，分步多次纯化，减少每一次ph的跨度；其二，稀释蛋白溶液，减少蛋白量就不容易发生聚集了
医往情深丁香园
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遇到这种我们一般会多次透析逐步降低离子强度，ph也要注意等电点的问题。
是小杨同学
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我觉得你可以多次透析，或者可以用ph，缓冲液来试一下
内科小护士
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需要改变透析时的一些条件，离子强度差过大，缓冲液的选择，目的蛋白的等电点，改变的方法有使用超滤换液。
jey1235
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阳离子柱一般可以采用pH6.0,应该可以应付大部分蛋白样品。
疏水柱的pH可以稍微降低到，7.5，这样后续透析到6.0pH 跨度不太大，可以最大限度缓解沉淀。
还有一方面，透析可以变成梯度透析，不要一次性透析到最终buffer。
dxyhsx123
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少沉淀目的蛋白，简单的就是少加一些蛋白样本，这样目的蛋白就少了啊。感觉题目问的不清楚。
ZZDX-YILILI
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蛋白质在等点电处会发生沉淀，所以如果想减少沉淀，改变下纯化介质的OH使其远离等电点。
verbalkint
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透析可能是会损失一些蛋白，我们实验室会再过一个size exclusion column而不用透析，但是也是会损失一点的
隔壁家的小夜猫子
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透析的时候条件可以摸索一下，梯度变小一点减少沉淀，但是你这个过完阳离子怎么PH变化这么大，纯化的buffer是不是能优化一下PH
dxy_bq4uxnd
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可以在每次纯化完使用tris-hcl调节PH，调整为合适PH后可能会减少目的蛋白的沉淀。
dxy_h7vcp8v3
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首先应该选择合适的缓冲buffer 稳定溶液体系的ph值。其次，采用软件预测自己目标蛋白的ph值及等电点。配置溶液的时候避开自己蛋白的等电点。因为到达等电点会让目的蛋白沉淀。最后，透析的时候控制透析时间，注意别透析时间过长，可以采用超滤浓缩的方法换蛋白buffer
dxy_50tk4bh8
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可以不使用透析换液，使用超滤换液，一点点去稀释，第一次可以只加几百ul，然后逐渐增大加液量，还要迅速搅拌，不要让局部形成沉淀。
dxy_pni5ki46
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透析如果蛋白沉淀很多很可能是前后的bufferph，离子强度差过大。透析很容易局部缓冲液浓度突然变化过大，遇到这种我们一般会多次透析逐步降低离子强度，ph也要注意等电点的问题
zxb597
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蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。
z流沙z
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一个蛋白可以超声破碎DNA，另外一个是梯度透析
dxy_4uyyu09r
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最简单的方法就是换一种纯化方法，纯化方法除了阳离子还有很多种的，另外也可以通过调整上样浓度或者柱子的活性来影响最终目的蛋白的沉淀量！
飞天幻雪
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蛋白纯化方式有很多种，如果目的蛋白沉淀过多，可以考虑换一种纯化方式。也可以先优化纯化条件看看能否解决，比如ph，缓冲液，柱子的选择，等等
于小闹0808
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如果有条件建议测一测DLS，看看你纯化的蛋白粒径是不是正常。至于筛选的话，不光是buffer的种类，添加剂也要筛选。如果你蛋白是个酶，测不同buffer中的酶活是最方便的了，其次可以用Thermal shift assay，具体方法你搜一下
Guoood
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1.保证纯化柱干净，先用buffer预清洗。2.将准备纯化的蛋白样品超声充分破碎可以试试。
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