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coip的对照相关的问题
丁香实验
如图，B分子量是50kd，A是180左右，IgG条带很明显，input几乎没有条带，这是为什么？(洗涤的时候都是洗了3遍)，如何解决？
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25 个回答
是小杨同学
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我觉得可能是input的浓度有点低了呢，或者是抗体的问题，如果是抗体的话可以跑wb去验证一下
JCorona
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可能是上样量不够，适当增多上样量，或者先跑个WB看看浓度。
dxyhsx123
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两方面。其一input的样本上样量和浓度是不是过少，其二，抗体是否合适。
lzy必有我师
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把input占裂解液的比例和ip的样品占elute的比例调成一样，这样你就会发现input只是点少了。
医往情深丁香园
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亲和也没问题，可以试一下先把input上个梯度做个wb看一下，再确定实验组的上样量。
dxy_bq4uxnd
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input没有条带，可能是一抗不适合做co-ip，根本没有拉下东西，那么后面的条带就都应该是非特异的条带。
dxy_qkedgrg7
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input浓度会不会太低了？IgG浓度太高，一起显就显不出来了，让input的蛋白跑个wb看看
一支肾上腺素
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首先要排除你的IP条带不是IgG的重链和轻链，再者排除你的一抗或者二抗没有污染，一般我们用新配的抗体理论上说IP的条带要和Input的一样。
内科小护士
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加入的A蛋白抗体和IgG 抗体，在最后一步的煮样中，被β巯基乙醇破坏了结构，变成了重链和轻链，随后由于A蛋白抗体和你的B蛋白抗体种属来源相同，又被你的B蛋白抗体识别出来，所以显影就出现了条带。
dxy_h7vcp8v3
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input 没有条带，检查是否自己加样进入之后，是否混匀取样，是否只取到了上清而没有取到蛋白样😭 检查自己的上样量；其次input加入后应该取样，不用进行洗，如果洗，检查自己用的盐离子浓度是否太大。
ZZDX-YILILI
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1.确定下B抗体是否完全适合做COIP.
2.做COIP时，B抗体投入的浓度是否按照说明书或者前期摸索过合适的浓度。
dxywode
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B分子的分子量为50KD，IgG的轻重链在50kd和20kd左右，而且这两条带western要出来的，所以沉淀下来目的蛋白的可能性很小。另外如果沉淀下来目的蛋白的量少，抗体敏感性再差一些，也可能引起阴性。
不知道可不可以做一个rabbit一抗的对照以明确2条带的性质？
dxy_pni5ki46
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igg组应该是非特异性的吧不应该有这么明显的条带，反而是input像是igg的结果
于小闹0808
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我认为是抗体有问题，可以直接跑常规WB验证一下，根据你的input你的第三个泳道的条带，应该是非特异性
jey1235
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如果确保input是有表达目标蛋白的话，有可能是WB抗体特异性不好，有可能是input量太低。
但是看IgG的条带感觉 IP的效果也很不理想，建议换一个tag或者换一下一抗试试。
个人感觉先确定WB的抗体效果，或者换内源/标签抗体，先确认表达问题。
dxy_4uyyu09r
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这两个蛋白都是表达量很低的吗？有没有预测或者qpcr的结果来参考，如果不是的话建议加大上样量，或者优化抗体使用浓度input这种就是没有处理的正常组不会完全没有条带的。
bamboopiggy
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你裂解total input的裂解液是不是和煮ip beads的不一样？理论上igG应该拉不下条带来，input的位置应该有条带，感觉是你ip的抗体不特异。先换抗体试试。
飞天幻雪
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input条带这么少，是不是蛋白表达本身就很低？只有ip后才能出现目的条带。还有一种情况就是ip后的是非特异的条带！建议下次多做几个阳性对照，同时也可以提高上样量看看蛋白到底是不是真的本底水平就很低
zxb597
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没检测到与目的蛋白相互作用的蛋白或者检测得到的信号太弱，或者不稳定。
dxy_w4oj7yoe
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是不是input浓度太低了？显然beads能把蛋白拉下来，说明蛋白肯定在，亲和也没问题，可以试一下先把input上个梯度做个wb看一下，再确定实验组的上样量
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