ELISA抗原包被问题

间接ELISA法检测血清中的抗体，自制HRP标记羊抗人IgG，自配TMB、过氧化氢底物，三者混合可显色，说明酶、底物都没有问题，包被重组抗原，进行间接ELISA，结果没有显色，空白、阴性样本、阳性样本的检测OD450值接近，如图
怀疑是板子包被出了问题。请问怎么能判断板子是否包被成功了呢？
我的抗原是买的重组抗原，分子量30kDa（二聚体），pI=11.46，His标签，包被时是用0.05 M pH9.6 碳酸盐缓冲液稀释呈10、5、2.5、1μg/mL，37℃ 包被2h。
之前预实验也用过pH8.0的Tris和pH7.4的PBS包被抗原，4℃包被过夜，用商品化试剂盒中的酶标二抗、底物检测，结果如下图
请大家帮我分析一下，问题是出在包被这个环节，是包被缓冲液选择的不恰当吗？阴性样本OD值如此之高是什么原因呢？包被后用含1%BSA的PBS封闭。
酶标板需要处理吗？看到有战友说用紫外照射2-4h，可能会增加吸附，为什么呢？