丁香实验_LOGO
登录
搜索
    搜索
    提问
    我要登录
    ｜免费注册

    ELISA抗原包被问题

    相关实验：ELISA 实验

    user-title

    丁香实验

    间接ELISA法检测血清中的抗体，自制HRP标记羊抗人IgG，自配TMB、过氧化氢底物，三者混合可显色，说明酶、底物都没有问题，包被重组抗原，进行间接ELISA，结果没有显色，空白、阴性样本、阳性样本的检测OD450值接近，如图
    怀疑是板子包被出了问题。请问怎么能判断板子是否包被成功了呢？
    我的抗原是买的重组抗原，分子量30kDa（二聚体），pI=11.46，His标签，包被时是用0.05 M pH9.6 碳酸盐缓冲液稀释呈10、5、2.5、1μg/mL，37℃ 包被2h。
    之前预实验也用过pH8.0的Tris和pH7.4的PBS包被抗原，4℃包被过夜，用商品化试剂盒中的酶标二抗、底物检测，结果如下图
    请大家帮我分析一下，问题是出在包被这个环节，是包被缓冲液选择的不恰当吗？阴性样本OD值如此之高是什么原因呢？包被后用含1%BSA的PBS封闭。
    酶标板需要处理吗？看到有战友说用紫外照射2-4h，可能会增加吸附，为什么呢？

    wx-share
    分享

    8 个回答

    user-title

    西柚味的芋圆

    有帮助
    4度过夜(指12h)包被效果不太好. 包被抗原浓度不确定,没定量,可能你的蛋白量太少(最有可能) 没有封闭的步骤 一抗稀释倍数不清 你的洗涤影响不会很大,一般没问题.
    user-title

    颜渊溪桥

    有帮助
    没有标准品无法验证包被是否有问题，可以买Biolegend 的coating buffer去做，一般没问题。
    user-title

    莹啊免疫啊

    有帮助
    包被缓冲液我只用过PBS，四度过夜然后再用PBS洗掉，阴性孔值太高可能是孔间污染了吧
    user-title

    sk1981521

    有帮助
    从图二看抗原包被是没有问题的，选择碳酸盐缓冲液稀释抗原即可，根据OD值抗原可在10和5之间在梯度稀释优化，可通过棋盘格法先确定抗原和二抗的工作条件再确定抗体的工作条件
    user-title

    txs900416

    有帮助
    多肽抗原一般由于分子量小，难以直接吸附到固相上，一般先用无关蛋白质偶联（例如BSA等），借助于偶联物与固相载体的吸附间接结合到固相载体表面。此外，缓冲液PH也可能影响抗原的构象。
    user-title

    peaceful13

    有帮助
    需要找高吸附材质的elisa包被板子进行包被～不要拿普通的细胞培养板，其次就是抗原跟板子的结合率也需要考虑
    user-title

    Timy最爱柠檬水

    有帮助
    实验步骤看来没有什么问题？会不会是洗板子过程中出现孔间污染呢？建议阴性孔多做几个复孔，同时减少二抗孵育的时间。
    user-title

    dxy_0mxazdaw

    有帮助
    紫外照射影响不大。考虑板子是否适合做elisa。另外，包被后要用buffer洗干净。

    相关产品推荐

    EZElisa™小鼠实验性自身免疫性前列腺炎抗原2（Eapa2）ELISA试剂盒-EZElisa™ Mouse Experimental autoimmune prostatitis antigen 2 (Eapa2) ELISA Kit

    EZElisa™小鼠实验性自身免疫性前列腺炎抗原2（Eapa2）ELISA试剂盒-EZElisa™ Mouse Experimental autoimmune prostatitis antigen 2 (Eapa2) ELISA Kit

    ￥6448

    外包实验/pcr/CCK8/ELISA/原位杂交

    外包实验/pcr/CCK8/ELISA/原位杂交

    ￥1800

    Immunotag™ 小鼠 Eapa2（实验性自身免疫性前列腺炎抗原 2）ELISA|Immunotag™ Mouse Eapa2 (Experimental autoimmune prostatitis antigen 2) ELISA

    Immunotag™ 小鼠 Eapa2（实验性自身免疫性前列腺炎抗原 2）ELISA|Immunotag™ Mouse Eapa2 (Experimental autoimmune prostatitis antigen 2) ELISA

    询价

    Immunotag™ 小鼠实验性自身免疫性前列腺炎抗原 2 ELISA 试剂盒|Immunotag™ Mouse Experimental autoimmune prostatitis antigen 2 ELISA Kit

    Immunotag™ 小鼠实验性自身免疫性前列腺炎抗原 2 ELISA 试剂盒|Immunotag™ Mouse Experimental autoimmune prostatitis antigen 2 ELISA Kit

    询价

    Immunotag™ 大鼠实验性自身免疫性前列腺炎抗原 2 同源 ELISA 试剂盒|Immunotag™ Rat Experimental autoimmune prostatitis antigen 2 homolog ELISA Kit

    Immunotag™ 大鼠实验性自身免疫性前列腺炎抗原 2 同源 ELISA 试剂盒|Immunotag™ Rat Experimental autoimmune prostatitis antigen 2 homolog ELISA Kit

    询价

    相关问答

    问

    竞争ELISA和阻断ELISA的区别是什么呢？

    3 回答 15152 围观
    2022-07-31

    问

    阻断ELISA

    3 回答 6735 围观
    2022-07-31

    问

    兔子试验为什么血液离心后呈淡红色？

    3 回答 4108 围观
    2014-11-05

    相关方法

    SPA夹心ELISA实验检测CIC

    ELISA实验

    Elisa 实验中怎么选择抗体？

    推荐阅读

    ELISA实验原理、步骤、ELISA问题分析

    丁香实验推荐阅读
    视频播放按钮

    ELISA 实验原理及常见问题解析

    丁香实验推荐阅读

    ELISA 常见问题

    提问
    扫一扫
    丁香实验小程序二维码
    实验小助手
    丁香实验公众号二维码
    扫码领资料
    反馈
    TOP
    打开小程序