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科研学霸天团，48小时有问必答
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问
P65和pp65都下调了，说明什么。
bamboopiggy
可以认为是抑制了nfkb通路，但是建议再检测一下通路中的p50等，并且更换内参不能用total的p65 当内参了，可以考虑beta-actin或gapdh
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问
如何确定已有目的基因的CDS在DNA上是完整的，而不是拼接得来的，即如何确定该目的基因的CDS在DNA上没有内含子的插入。
asswei
内含子外显子都是相对的，在可变剪切情况下有些内含子就变成了外显子。大多数物种有基因组数据库如拟南芥的TAIR网站（www.arabidopsis.org），在数据库中搜索基因名，上面有相对准确的外显子内含子标注（可变剪切的存在导致外显子内含子并不是绝对的）
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问
麻烦帮我看看我的成脂诱导对不对
毛利小五郎的徒弟
看着像脂滴，可以做实验验证一下
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问
蛋白质与免疫亲和介质结合需多长时间?
毛利小五郎的徒弟
一般12小时之内，就会得到结果。
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问
wb胶板的配制求助大佬解答
balalaLy
分离胶用水压没有问题，我一直都是用水，那些痕迹可能是玻璃板上的脏东西或者是你配分离胶的时候有漏胶。另外，你的浓缩胶太长了，跑胶效果可能会没那么好。
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问
慢病毒感染细胞实验滴度问题
asswei
可能存在启动子表达较弱，残留有氨基酸等情况
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问
有可溶性表达无酶活
毛利小五郎的徒弟
可溶性表达一般检测的是结构，无酶活可能是活性区域被改变。
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问
WB内参条带异常分析
申东熙老伯
目的条带能跑出来吗？可能是蛋白样品制备过程出了问题。
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问
请问过曝了的western blot图片后期怎么补救
bamboopiggy
重新进行实验并调整曝光时间，以获得更好的图片。通过调整图像处理软件中的曝光和对比度参数，尝试使图片更清晰。使用图片编辑软件，例如Adobe Photoshop或GIMP，进行后期处理。其中一种方法是使用曲线工具来调整曝光和亮度。无论哪种方法，需要注意避免在修复过程中引入任何偏差或误差。
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问
凯氏定氮法测定蛋白质定容后是绿色的是怎么回事啊？
asswei
可能试剂失效，试剂在保存、使用时遭到污染，影响实验结果
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问
ELISA与ELispot
bamboopiggy
Elisa和Elispot是两种不同的免疫学实验技术。Elisa（酶联免疫吸附实验）是一种广泛用于测量蛋白质、抗体、药物等化合物浓度的技术。它基于酶标记抗体与待检测物质结合后通过底物反应使底物发色，从而检测待测分子的浓度。而Elispot（酶联免疫斑点实验）则是用于测量单个免疫细胞的分泌物（如细胞因子）的技术。它基于单个免疫细胞在特定抗原刺激下分泌细胞因子，导致局部斑点形成的原理。二者的抗体不能通
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问
小鼠CSF1-R受体分子量多少？
bamboopiggy
这个你可以通过序列预测，也可以直接去抗体公司查说明书，小鼠CSF1-R受体的分子量约为150 kDa
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问
高效液相测样品各成分含量，应该先测混标还是样品，根据哪个来优化方法
毛利小五郎的徒弟
高效液相测样品各成分含量，应该先测混标，根据混标结果来优化方法
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问
人参皂苷re，rg3，Rb1，有紫外吸收吗
龙大人驾到
参皂苷RG3和RB1是有紫外吸收的，具体的紫外吸收范围可以参考科学文献。
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问
高效液相检测人参皂苷含量，流动相加醋酸还是磷酸缓冲液哪种好 及理由?
龙大人驾到
磷酸缓冲液，因为磷酸缓冲液具有良好的稳定性、高效性和耐变性，可有效抑制由于pH值变化所引起的人参皂苷含量变化，从而提高液相检测的精准性。
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问
WB曝光的条带整体模糊，条带边界发毛，这是为什么？
申东熙老伯
可能是转膜的时候，三明治结构之间滑动了。
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问
求助，想问一下各位大佬转膜槽里可以只放一个夹子吗
毛利小五郎的徒弟
可以一起跑的，延长时间就可以，如果你想分开跑，可以加一个夹子。
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问
SPR图像倒置
毛利小五郎的徒弟
考虑体系内有杂质污染，所以会产生倒置图像。
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问
求助︱慢病毒感染
毛利小五郎的徒弟
建议梯度筛选，很显然你的浓度有问题，这个时候贸然增加或减量都不正确
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问
WB求助！！Lc3b小分子跑不出！
毛利小五郎的徒弟
小分子一直不好跑，建议增加上样量，然后提高膜的性能
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