外周血提RNA降解

可以按以下实验步骤进行：

1.收集新鲜人血液并立即用Ficoll分离白细胞。

2.用冰冷PBS洗涤外周血淋巴细胞3次。

3.在50ml塑料离心管中收集外周血淋巴细胞，并加入7ml裂解缓冲液(可溶解达到5×108个外周血淋巴细胞)，然后剧烈涡旋振荡以溶解细胞。

4.加入7体积(49m1)4molL氯化锂，4°℃孵育15~20小时(过夜)。

5.将悬液转移到30mlCorex管内，在吊桶式转头内4°℃离心2小时，6500r/min。

6.弃去上清，并用Kimwipe擦拭试管口。用

3molL氯化锂(大约15ml)重悬，收集沉淀.将沉淀重悬液离心，6500r/min 1小时。

7.弃去上清，用2m1RNA溶解液溶解沉淀。在-20℃下，彻底冷冻悬液。

8.复溶悬液，每10分钟涡旋20秒，共45分钟。9，用等体积酚抽提1次，并用等体积氯仿抽提1

次。

10.加入1/10体积的3mol/L乙酸钠，pH4.8和2体积-20℃乙醇。彻底混合溶液，并在-20℃下孵育过夜。

​11.在吊桶式转头内离心RNA，12000r/min 30分钟。用0.2m1DEPC处理水重悬沉淀。将溶解的

DNA转移至1.5m1微量离心管内，并加入1/10体积3molL乙酸钠，pH4.8和2体积-20°℃乙醇，重新沉淀。并以乙醇沉淀物形式保存RNA，直至准备使用时。

RNA的提取方法一般分为有机物提取法和硅胶膜筛选法两种。

有机物提取法，如您提到的使用Trizol试剂提取RNA，通常适用于细胞和组织样本的RNA提取。但是，血液样品中存在大量的红细胞和其他细胞碎片，这些细胞碎片可能会影响RNA的质量和纯度。您可以尝试使用RNA血浆/血清分离试剂盒，可以将血液样本中的RNA分离出来，减少细胞碎片的影响。

硅胶膜筛选法是另一种RNA提取方法，适用于小样本和低浓度RNA样品的提取。硅胶膜筛选法可以更有效地去除DNA、蛋白质和其他杂质，提高RNA的纯度。您可以尝试使用商业化的RNA筛选试剂盒，如RNeasy Mini Kit，这些试剂盒使用硅胶膜筛选法提取RNA。

另外，全血提RNA和先提取PBMC再提RNA的主要区别在于前者包含了血液中的所有细胞类型，后者只包含PBMC，即淋巴细胞和单核细胞。根据研究的需要，您可以选择适当的RNA提取方法。

最后，如果您遇到了RNA质量和纯度的问题，可以尝试优化RNA提取的条件，例如调整Trizol的使用量、离心速度和离心时间等因素。同时，RNA样品的处理和保存也非常重要，建议尽快进行下一步实验，避免RNA的降解和损失。

提取后立即冷存，提高提取量减少降解量