用于反转录PCR的RNA浓度范围是？
PCR的小女孩
最近在用 大脑组织提取total RNA，用的是Qiagen的Rneasy mini kit试剂盒；
做完后用nano drop测得浓度是14.4ng/ul，A260为0.359，260/280为2.56。
然后。。用 5ul的RNA进行RT-PCR，引物是自己设计的，用的是Takara的one step试剂盒（由于本人菜鸟，离不开试剂盒啊，烧钱。。）
试剂盒上是说用1ug的RNA template，但是RNA浓度实在太低了，只加了5ul
最后，凝胶检测，结果如图：
最右为marker，每条带间距100bp，
左一是前两天RT-PCR出来的，第一次跑的时候还是有条带的，现在竟然没有了。。
左二、左三；左四、左五；左六、左七 是使用针对同一条基因设计的两对引物 P出来的。
从这张图里，大侠们能看出什么问题吗？ 我应该做哪些改进？
1 个回答
xiadongliang
反转录问题应该不大，1ug的RNA template实在是太多了。去哪儿弄那么多做反转录啊。
可能是你设计的引物不太好，扩增存在非特异性条带。
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