rna的二级结构对全长rna反转录有何影响？怎样排除影响因素？

AMV在高反应温度时可消除mRNA的二级结构对逆转录的阻碍

若要获取全长RNA的反转录，那么RNA二级结构的问题就不可忽略，因为反转录酶在遇到此类结构后会终止反应或从模板上脱落下来。

也许你很难判断RNA是否具有二级结构，但如果基因中GC含量较高，通常意味着RNA很难被变性且不可能是单链，此时就需要在65℃ 5min对其进行充分变性，以避免其对实验结果的影响。

另外，还有一种方法可解决此问题，即使用一种最适温度高于正常标准（37℃-42℃）的逆转录酶。比如来自Life Technologies的Themoscript酶就常用于具有复杂结构RNA的逆转录。当然也存在一些即使在常规逆转录温度（37℃-42℃）的条件下，也能跨过RNA二级结构的高效率逆转录酶，即使是针对富集GC序列的RNA也能得到很好的结果。

在进行反转录的过程中，当引物延伸到有二级结构的地方，反应就会被迫终止，影响cDNA的合成长度。此时可建议先将模板进行65℃孵育5min然后迅速冰上冷却使二级结构变性；同时可通过在较高的温度下（如55℃）反应以降低RNA二级结构的形成。