扩增曲线异常-刚跑就有扩增并消失
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如下图，前10个循环出现扩增曲线并消失，后面的是熔解曲线
现在有几个问题想请教各位大佬
1、前面的扩增并消失是啥情况？
2、溶解曲线前面的沟是什么？什么原因造成的？
3、到达平台期后，扩增曲线下滑是什么原因（这个下滑是同一目的基因，不同样本但模板量相同的情况下，有的下滑，有的无异常）
3 个回答
高山云初
1.扩展失败,应调整反应条件和体系
2.退火延伸阶段（60度，1min）存在部分链退火不充分；因此在信号刚开始采集阶段，部分链会继续退火形成双链，荧光信号增强，退火充分后荧光信号达到最大值，此后随着温度的上升，pH降低，导致荧光信号强度降低，反映就是出现沟了
3.意味着扩增产物不再是目标序列，而是非特异性扩增了
此用户已注销
首先要确定试剂是否有效,包括查看试剂是否在有效期内,是否反复冻融多次,运输条件是否正常。可以通过比较试剂的批次号,结合实验中的阳性对照结果,确定试剂的有效性。
其次要观察扩增完的试剂体积,如果在扩增过程中有试剂的蒸发,可能会引起扩增曲线抬升现象,如果实验体系中加入了ROX作为参比荧光,ROX荧光可以区分扩增曲线抬升是真扩增,还是蒸发。
周末也要努力呀
溶解曲线有勾不平滑是特异性不好，去NCBI网站BLAST一下在使用
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