扩增曲线异常-刚跑就有扩增并消失

1.扩展失败,应调整反应条件和体系

2.退火延伸阶段（60度，1min）存在部分链退火不充分；因此在信号刚开始采集阶段，部分链会继续退火形成双链，荧光信号增强，退火充分后荧光信号达到最大值，此后随着温度的上升，pH降低，导致荧光信号强度降低，反映就是出现沟了

3.意味着扩增产物不再是目标序列，而是非特异性扩增了

首先要确定试剂是否有效,包括查看试剂是否在有效期内,是否反复冻融多次,运输条件是否正常。可以通过比较试剂的批次号,结合实验中的阳性对照结果,确定试剂的有效性。

其次要观察扩增完的试剂体积,如果在扩增过程中有试剂的蒸发,可能会引起扩增曲线抬升现象,如果实验体系中加入了ROX作为参比荧光,ROX荧光可以区分扩增曲线抬升是真扩增,还是蒸发。

溶解曲线有勾不平滑是特异性不好，去NCBI网站BLAST一下在使用