同源重组克隆时序列GC含量过高，一直连不进去，有什么办法可以改善这个问题吗？

使用GC buffer我们实验室有人搞出来的

以下是一些建议可以帮助您改善这个问题：

1. GC buffer：GC buffer是一种用于增加PCR成功率的缓冲液，可以在PCR反应中帮助解决高GC含量的序列难题。虽然同源重组不是PCR，但尝试在同源重组反应中添加适量的GC buffer，可能会有所帮助。您可以尝试使用低浓度的GC buffer，并在实验中逐渐优化其用量。

2. 优化酶和缓冲液：尝试使用具有高GC容忍性的DNA聚合酶和相应的缓冲液。某些商业化的聚合酶和缓冲液配套可以提供更好的适应高GC含量序列的能力。

3. 引物设计：重新设计引物，以便在目标序列中使用较低的GC含量区域作为引物结合位点。您可以使用引物设计软件来优化引物的设计，并确保引物与目标序列的高GC区域的互补性较好。

4. 引物热解性能：优化引物的热解性能，确保引物在反应过程中能够充分解离。这可以通过调整引物的长度和热解温度来实现。

5. 分段克隆：如果整个序列都难以克隆，可以考虑将目标序列进行分段克隆。通过将序列划分为较短的片段，可以降低每个片段的GC含量，从而提高克隆的成功率。

6. 尝试其他克隆方法：如果同源重组仍然无法解决问题，您可以尝试其他克隆方法，如转座子介导的克隆、Gateway克隆或其他适用于高GC含量序列的克隆技术。

同源重组也可以使用GC buffer，可以辅助克隆连接