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同源重组后大肠转农杆

相关实验:同源一步荧光等位基因特异性PCR

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dxy_8t0ljry9

我的同源重组的产物以大肠杆菌菌液的形式保存,1比1甘油保存在负80度冰箱,拿出来活化,先是划斑,然后挑斑小摇,再大摇,小摇的时候我跑了个条带,条带也很清晰且符合,结果我大摇后提取质粒准备转农杆菌,为啥我的质粒就提不好,浓度就不高质量也不好,提了有三四次了,浓度低不说质量还不好峰值不高。请问各位大佬能给我提点什么意见么??

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2 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

更改质粒类型,然后提高农杆菌的含量

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loveliufudan

有帮助

可能是以下一些原因导致质粒提取和转化效果不好:

菌液保存时间过久,导致细胞死亡或质粒降解。虽然甘油可以增加细胞冻存的稳定性,但如果保存时间过长,仍可能导致细胞死亡或质粒降解。建议在长时间保存前,将菌液分装并尽快冻存。

活化方式不够适宜。划斑和挑斑等方法可能会损伤部分细胞,如果处理不当,也可能导致质粒降解。建议在活化过程中注意操作规范,选择适宜的活化条件。

质粒提取方法不适当。不同的质粒提取方法对于不同类型的质粒有不同的适应性,如果选择的提取方法不适当,可能会导致质量不好或者提取效果不佳。建议重新检查质粒提取的步骤和方法,或者考虑更换质粒提取试剂盒。

转化条件不适当。农杆菌的转化条件也可能影响转化效率和质粒质量。建议重新检查转化条件,如电穿孔电压、时间、溶液pH等,或者考虑使用其他转化方法。

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