同源重组后大肠转农杆

更改质粒类型，然后提高农杆菌的含量

可能是以下一些原因导致质粒提取和转化效果不好：

菌液保存时间过久，导致细胞死亡或质粒降解。虽然甘油可以增加细胞冻存的稳定性，但如果保存时间过长，仍可能导致细胞死亡或质粒降解。建议在长时间保存前，将菌液分装并尽快冻存。

活化方式不够适宜。划斑和挑斑等方法可能会损伤部分细胞，如果处理不当，也可能导致质粒降解。建议在活化过程中注意操作规范，选择适宜的活化条件。

质粒提取方法不适当。不同的质粒提取方法对于不同类型的质粒有不同的适应性，如果选择的提取方法不适当，可能会导致质量不好或者提取效果不佳。建议重新检查质粒提取的步骤和方法，或者考虑更换质粒提取试剂盒。

转化条件不适当。农杆菌的转化条件也可能影响转化效率和质粒质量。建议重新检查转化条件，如电穿孔电压、时间、溶液pH等，或者考虑使用其他转化方法。