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PCR溶解曲线出不来这是什么原因?

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乳钙碎冰冰



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3 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑是探针或者引物没有引起限制性酶切,所以溶解曲线出不来,建议更换引物及探针类型

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huarenqiang5

有帮助

考虑以下几点原因:

1、引物没有设计好,溶解曲线就是为了区分样品是否有非特异性扩增和初始模板有无被污染的情况,实验室用BIOGHC-PCR检测了DNA,如果出现单一峰且峰值在Tm值位置出现,这就证明没有非特异性扩增,且初始模板没有被污染。

2、没有给数据编号,数据在分析的时候需要分组。

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loveliufudan

有帮助

可能有几个原因:

1. 引物设计问题:PCR溶解曲线分析通常用于检测特定的目标序列。如果引物设计有误,可能无法放大目标序列。确保引物序列正确,并且与目标序列相匹配。

2. DNA质量问题:PCR溶解曲线分析需要高质量的DNA作为模板。如果DNA样本质量不佳,例如受到污染、降解或稀释过高,可能无法产生明显的曲线。确保使用纯净、完整的DNA,并且适当稀释。

3. 反应条件问题:PCR溶解曲线分析的成功也与PCR反应条件有关。确保使用正确的温度、酶和缓冲液,并按照标准的PCR程序进行反应。

4. 检测问题:PCR溶解曲线分析通常使用荧光染料或探针来监测PCR反应的产物。如果荧光染料或探针选择不当、浓度不正确,或者检测设备设置有问题,可能无法观察到明显的曲线。确保选择合适的染料或探针,并按照设备要求进行检测。


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