丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

请问一下做qpcr时经常有污染,有什么方法可以去除呢

相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

user-title

Neough

wx-share
分享

6 个回答

user-title

曙光karry

有帮助

1.切记产物不要在实验区打开

2实验区每天要酒精消毒,紫外杀菌,且实验室要多通风

3有条件的话,加模板不要每次在同一个超净台操作

user-title

juyue2010

有帮助

引物进行分装,使用含UDG酶的qPCR酶

user-title

huarenqiang5

有帮助

首先要辨别PCR污染的来源。然后针对性给予相关措施。

  在排除试剂污染的可能性外,更换试剂后,若不久又发现试剂被污染了,则考虑可能为环境污染。环境污染的最主要原因是DNA溶液的溅出和DNA气溶胶造成的实验区域的污染,这尤其在PCR产物扩增区容易出现。移液器枪头和EP管架是也较常见的污染部位。

  如果是环境污染,还可对每个区域进行涂抹采样和核酸提取,以最终鉴定污染的区域所在。

  对PCR的环境污染,有如下几种治理方法:

  1. 用常规消毒液定期在环境中喷雾消毒处理。

  2. 稀酸处理法:对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡,使残余DNA脱嘌呤;其缺点是盐酸对皮肤有一定的腐蚀性。

  3. 紫外照射法:紫外波长一般选择254/300nm,照射30分钟至2小时。但需要注意的是,UV照射仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大。

  4. 选用商品化的DNA污染祛除剂。

 对于PCR反应液的污染,可采取以下方法:

  1. DNase I 法

  2. 内切酶法

  3. 紫外照射法

  4. 尿嘧啶糖苷酶(UNG)法:

总之,灵敏度越高的PCR反应越容易出现PCR污染。采用适当的措施消除污染,可以避免重复实验和浪费试剂,也使得实验结果更加可靠而。

user-title

天一湖医者

有帮助

传统的紫外线,酒精擦拭,84消毒液都有一定的功效!

user-title

bamboopiggy

有帮助

找一个带去除基因组dna的反转录试剂盒,应该就可以了

user-title

毛利小五郎的徒弟

有帮助

在PCR实验前用70% 乙醇擦拭工作台

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序