PCR溶解曲线问题答疑

溶解曲线是为了观察扩增发出荧光的片段是不是需要的产物。如果溶解曲线做出来只有单峰，且出锋位置是退火温度，那么这个是产物发出的荧光，实验结果有效。

溶解曲线：

（1）溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线；

（2）一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间；

（3）出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组DNA污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因所致；

（4）基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。

溶解曲线是为了验证扩增产物特异性的，要是溶解曲线是单峰说明产物只有一条，结果较好；要是双峰说明产物不特异，可能存在引物二聚体或非特异性扩增，有可能引物设计有问题。

可以用应该是单峰，光滑的，温度在80-90