请问pcr内参很高是怎么回事呢？之前跑鼠没问题，但人的就很高？

可能的原因有以下几点:

1.RNA质量不行。具体就是RNA浓度很低，或者部分降解；

2.cDNA浓度不够。检查cDNA是否稀释，反转录时RNA的量是不是不够；

3.引物设计的不好。引物结合的效率不高，需要更多的循环数才能达到阈值；

4.选择内参基因不对。不是所有物种和材料都是相同内参，可能前期要多选几个内参，看那个内参比较稳定

内参很高的话，可能原因：有可能是引物使用时间过久或者保存不当，出现了降解。可能是RNA质量不好，比如260/280, 260/230值偏低；可能是反转时RNA含量过低；我们反转20uL体系一般用1ug RNA。可能是定量时cDNA以及引物含量偏低。

内参也是有选择性的，不是一成不变的，18sRNA虽然很稳定，但在有的组织和细胞中，18sRNA的表达是受到抑制的，所以出现了浓度减低，CT值升高的现象

有可能是RNA降解了，也有可能是引物不匹配

你qpcr 跑人和鼠的内参，不会是用的同一套引物吧？所以对鼠的特异性强，对人的就不行。

RNA浓度太低，逆转录效率太低，热启动酶不行（就是MIX不行）要注意你的MIX的热启动时间，看样子你的整个体系没有摸好