做qPCR曲线出现异常？

有可能是模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线就趴下来了。这种情况大家也不要慌，可以减小基线终点（例如基线期默认 3 - 15 个循环，改为 3 - 10 个循环），重新分析数据，一般都能得到一个比较好的结果。

反应体系引起的扩增曲线不光滑---扩增效率偏差（过高或过低）

A. 扩增效率过高

出现非特异扩增或引物二聚体：反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量较差，可能导致出现抑制 PCR 反应的现象。在绝对定量时表现扩增效率大于110%。

解决方案：去除模板浓度最高的反应孔并重新分析标准曲线；对目的基因做标准曲线，一般用质粒做梯度稀释，或用 PCR 产物做梯度稀释，然后做定量扩增，通过曲线评估反应效率。绝对定量有效的扩增效率在 90%-110%；重新纯化模板，去除模板中存在的潜在抑制物。

B. 扩增效率过低

扩增效率过低主要表现在试剂浓度不适（主要是引物、镁和 Taq DNA 聚合酶，尤其是在多重实验中），引物对Tm之间的差异超过5°C以及热循环条件不适，试管中各种同源物质的竞争作用可造成反应效率低下。绝对定量表现：扩增效率＜90%。

解决方案：对上述因素逐一排除后进行调整优化实验体系或选用Biog、ABI等质量比较稳定的试剂盒。

C. 个别扩增曲线异常

如个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡，由于温度升高后气泡破裂，使仪器检测到的荧光值突然降低所致。进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。

仪器设置不当引起的曲线异常：基线设置不当，如扩增曲线断裂或下滑：基线的终点值大于 Ct 值。减小基线终点 (Ct 值- 4)，重新分析数据。

Rox 添加不当：表现为扩增曲线呈锯齿状且不连续，需校正参比染料。

是指这样的曲线么这种就是模板加多了，不过也不影响你分析数据，看一下趋势，然后再做重复

可能原因是模板浓度太高，基线下移。可以将基线设置在3-15个循环开始

可能是你的pcr那个孔有问题，或者是加热模块有问题