做了三次qpcr独立重复，前两次都有相同趋势，第三次出现了严重反差，实验过程是没问题的操作也很严谨，这种情况要怎么办呢

遇到这种情况建议详细记录实验过程再次尝试，因为导致这种结果出现的情况太多了，需要逐一排除

是不是试剂出了问题，对比一下前后几次实验中各个基因的Ct值有没有差异很大，尤其是内参。

确保重复用的是同样的东西，包括板子和枪尖，以及酶，和pcr仪，否则出现反差，不好说具体是什么原因，一般情况下，只要不是反复冻融，导致酶坏了，或者是机器恰巧坏了，实验结果solid的话，趋势应该是一致的