pcr扩增曲线有异常，总出现s型曲线

检查是不是都是在同一个孔，可能是这个孔被污染了，或者是热板盖歪了

原因很多：反应体系引起的扩增曲线不光滑---扩增效率偏差（过高或过低）

A. 扩增效率过高

出现非特异扩增或引物二聚体：反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量较差，可能导致出现抑制 PCR 反应的现象。在绝对定量时表现扩增效率大于110%。

B. 扩增效率过低

扩增效率过低主要表现在试剂浓度不适（主要是引物、镁和 Taq DNA 聚合酶，尤其是在多重实验中），引物对Tm之间的差异超过5°C以及热循环条件不适，试管中各种同源物质的竞争作用可造成反应效率低下。绝对定量表现：扩增效率＜90%。

C. 个别扩增曲线异常

如个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡，由于温度升高后气泡破裂，使仪器检测到的荧光值突然降低所致。进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。

仪器设置不当引起的曲线异常：基线设置不当，如扩增曲线断裂或下滑：基线的终点值大于 Ct 值。减小基线终点 (Ct 值- 4)，重新分析数据。

Rox 添加不当：表现为扩增曲线呈锯齿状且不连续，需校正参比染料

有可能是以下环节存在问题：

1、模板的浓度太高或者降解。

2、荧光染料的降解。

3、在操作荧光定量 PCR 时，带上新的一次性手套,盖上避免任何指纹或者字迹等。

4、液体挥发。耗材气密性等问题引起液体蒸发,没有很好的聚集在管子里;

5、气泡。操作问题如移液枪加样引起的气泡问题。