丁香清香
我自己rna提的很好,但是转录后pcr 没有目的条带。使用的是师兄师姐的引物,同样的条件,要p的目的片段也一样。为什么会这样子呢,难道引物在一段时间以后就不适用了吗?
balalaLy
引一般引物稀释后保存在-20可以用挺久的,4度的话可能超过一个月就不敢保证了
天一湖医者
可能是退火温度过高,影响引物与模板结合—— 使用引物设计软件建议的退火温度,退火温度一般比引物的Tm值低5℃。其他反应条件不合适—— 选用试剂说明书建议的变性温度和时间,退火时间,延伸温度和时间,循环数。
bamboopiggy
如果你确定你的rna没有问题,重新订一下引物试试,有时候不同公司的引物可能会有差异。同一公司的引物也可能有错误
未来9
会不会是以下问题:RNA降解;引物配置是否存在问题。
实在不行就引物重新按照原来的序列合成再试试
Eason老歌迷
RNA如果不立刻逆转录要保存的话建议用去离子的甲酰胺溶解并存于-20度,这样可以免遭RNA降解,另外RT结束后如果不立刻PCR,逆转录产物要放在95度水裕30分钟以降解逆转录酶。想问一下,你的引物是怎么配的?我一般把引物浓度配为25uM储存的,如果引物配制没问题那就重新定一样的引物再试试看。
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