还不会用 NCBI 设计 PCR 引物吗？

首先打开 NCBI 主页，大 E 浏览器有时候打不开，可以换个浏览器试试。

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

然后按照以下步骤进行就可以了。

打开主页后，选择 Gene，然后在后面输入目的基因名，基因后面可以加空格然后加种属缩写，不知道种属缩写也可以不加。

点击 Search。

找到目的基因，注意后面标记的种属，然后点基因名。

进入下一页面后，向下拉，直到 mRNA and Protein，点击红色数字。

向下拉。

复制序列，然后另打开 NCBI 主页，点右侧第五个 Blast。

向下翻到 specialized blast，点第二行 Primer-Blast ↓

注意为FASTA sequence，因此在第一行键入 >ACTB（ACTB 为目的基因名），然后回车，粘贴刚刚复制的序列。

将上图 product size 数字改成下图数字

继续。

下拉菜单如上图选择

上图 intron inclusion 后的勾勾，但如果勾选上得不到结果，就可以不选。以上两步都是为了防止 DNA 污染。

其它都可以不改，然后点 Get Primers。

需要运行几十秒，得到 10 对引物后进行选择，最好 GC 百分比在 45%-55% 之间，Tm 在 60℃ 左右。