NCBI设计PCR引物图文详解，看了就会

首先打开NCBI主页，大E浏览器有时候打不开，可以换个浏览器试试

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

然后按照以下步骤进行就可以了

打开主页后，选择Gene，然后在后面输入目的基因名，基因后面可以加空格然后加种属缩写，不知道种属缩写也可以不加

点击Search

找到目的基因，注意后面标记的种属，然后点基因名

进入下一页面后，向下拉，直到mRNA and Protein，点击红色数字

向下拉

复制序列，然后另打开NCBI主页，点右侧第五个Blast

向下翻到specialized blast，点第二行 Primer-Blast ↓

注意为FASTA sequence，因此在第一行键入>ACTB（ACTB为目的基因名），然后回车，粘贴刚刚复制的序列

将上图product size数字改成下图数字

继续

下拉菜单如上图选择

上图intron inclusion后的勾勾，但如果勾选上得不到结果，就可以不选。以上两步都是为了防止DNA污染。

其它都可以不改，然后点Get Primers

需要运行几十秒，得到10对引物后进行选择，最好GC百分比在45%-55%之间，Tm在60℃左右。