同一批样本,两次反转录成的cdna，为什么rt-pcr差异那么大？是反转录试剂新旧的问题吗？

1.你两次反转录时间间隔多久？时间长了，本身rna就会有降解。2.你反转录的效率每次和每次也是略有差异的，

原因太多了，这种情况最需避免的就是加样的时候造成了加样量之间的误差，建议多做几个重复，将重复中数据明显差距几个以上的循环的数据剔除。加样的时候样品混合好再分装。

两次的差异大,可能是cDNA的保存问题,一般保存在-20度,但是时间长了就会有所降解.
如果降解了,你再做,相对表达量就会降低.
至于复孔之间的差异,我到觉得不是很大,0.5以内可以了,已经RT-PCR只是一个半定量的方法.