反转录差异显示技术(DDRT

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朱　靖1，杜立新2

 

（1.山东农业大学动物科技学院生物工程实验室，山东泰安 271018; 2.中国农业科学院畜牧研究所 ，北京 100094）

 

摘　要:　运用mRNA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况，为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理,优点与缺点,以及近年来对该技术涉及的RT-PCR 方法、引物设计、PCR反应参数、电泳及差异条带的显示方法以及杂交方式进行了论述和评价，并对其应用前景进行了简单分析。

关键词：反转录差异显示PCR;反向Northern 印迹;银染 

基因的差异性表达不仅是细胞形态和功能多样性的根本原因，而且也是各种生理及病变过程的物质基础，因此，分离、鉴定差异表达的基因具有重要的意义。真核生物基因组中，仅约10％～15％的基因在细胞中表达，而且不同发育阶段、不同生理状态和不同类型的细胞中表达的基因也不尽相同。1992年美国哈佛医学院的两名科学家Liang P和Pardee A D 根据高等生物成熟的mRNA都带有poly(A)的特性，用特定的锚定引物反转录后，进行PCR扩增，率先建立了mRNA差异显示技术，由此可见其实用性和广泛性。DDRT-PCR 的优点可概括为3SRV(simplicity,sensitivity,speed,reproducibility,versatility)[3]：①简单，技术上仅仅依靠PCR和DNA测序胶电泳；②可以同时分析多组样品；③灵敏性高，仅需0.2 μg总RNA作为起始材料，可检出低丰度mRNA；④实验周期短，约8 d即可完成，便于重复；⑤最突出的优点是实验过程中可步步验证比较；⑥可进行多基因家族的表达分析。