关于随机引物反转录的一些问题
嘻哈哈哈321
各位大佬，我在mRNA反转录合成cDNA后，想要通过随机引物的形式合成第二链。...之后我PCR成双链之后用磁珠纯化，发现并没有过滤掉短片段，但造成了浓度的降低。想问一下这是什么情况造成的。
3 个回答
Eason老歌迷
你想纯化，但是发现没有过滤掉短的，是这样吗？我有一个方法，可以试一试。1. 20μLPCR产物加入5 μL 5M的NaCl（终浓度0.5 M）。2. 加入25 μL 24%的PEG8000溶液（终浓度12%）；混匀。3. 4度放置30 min。4. 4500 g，4℃离心30 min 后，立即将板反扣在厚的吸水纸上，离心至150 g，去除上清。5. 加入70 μL 75%EtOH，4500 g，4℃离心15 min，立即再板反扣在厚的吸水纸上，离心至150 g，去除上清；重复一次。6. 50℃或室温干燥，加入10 μL ddH2O溶解，即为纯化的PCR产物，测序时取1 μL 做模板。
bamboopiggy
你是想用cDNA扩增你想要的目的片段吧？可能你的片段太长了，或着你需要用特定引物来进行pcr扩增。
whilt-shirt
有可能是引物不匹配，建议设计新的引物
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