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DNA 纯度的判断根据 OD260/OD280 的比值判断,在什么范围是最佳?

相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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赵栋2012

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1 个回答

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小坏2012

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符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6~1.8之间,低于此范围表明蛋白质含量超标,高于此范围表明样品中含有RNA。一般机器给出的比值是分子分母同时减OD320所得,你可以自己算一下OD260/OD280,如果在要求的范围内,说明你的OD320偏高,即可能有有机物污染,比如酒精未充分挥发。纠正一下,纯DNA的A260/A280应大于1.8,纯的RNA应达到2.0,样品中如果含有蛋白质及苯酚,A260/A280比值会明显下降。对于纯的样品,只要读出260 nm 的A值即可以算出含量。通常以A值为1相当于50微克/ml 双螺旋DNA,或者40微克/ml 单链DNA(RNA),或者20微克/ml 寡核苷酸计算。OD260/OD280=1.9~2.0 RNA居多,纯度已经很高了。纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白质、酚等污染)纯RNA:1.7 <OD260/OD280<2.0(<1.7时表明有蛋白质或酚污染;>2.0时表明可能有异硫氰酸残存)
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