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扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅?

相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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赵栋2012

扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅是什么原因啊?
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1 个回答

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tao0129

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1.最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系.2. 与反应起始时RNA的总量及纯度有关。3. 建议在试验中加入对照RNA。4.第一链的反应产物在进行PCR扩增时,在总的反应体系中的含量不要超过1/10。5. 建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物(GSP)用于第一链合成。由于RNA模板存在二级结构,如环状结果,有可能导致GSP无法与模板退火;或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。6. 目的mRNA中含有强的转录中止位点,可以试用以下方法解决:(1)将第一链的反应温度提高至50℃。(2)使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行第一链反应。
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