RT-PCR 没有产物是为什么？

可能原因： 1）RNA被降解建议解决方法：在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA；在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA；如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否则抑制剂或释放所有结合的RNase。而且，在≥0.8 mM DTT时加入RNase抑制剂，一定要存在DTT。 2）RNA中包含逆转录抑制剂建议解决方法：通过乙醇沉淀RNA除去抑制剂。用70％（v/v）乙醇对RNA沉淀进行清洗。可以加入糖元（0.25 μg到0.4 μg/μl）以帮助小量样品RNA的恢复。逆转录抑制剂包括：SDS，EDTA，甘油，焦磷酸钠，spermidine，甲酰胺和胍盐。将对照RNA同样品混合，同对照RNA反应比较产量以检验抑制剂。 3）多糖同RNA共沉淀建议解决方法：使用氯化锂沉淀RNA以除去多糖。 4）用于合成cDNA第一链合成的引物没有很好退火建议解决方法：确定退火温度适合您的引物。对于随机六聚体，建议在反应温度保温之前先在25℃保温10分钟。对于基因特异性引物（GSP），可以试一下其他GSP，或换用oligo(dT)或随机六聚体.确定GSP是反义序列。 5）起始RNA量不够建议解决方法：增加RNA量。对于＜50 ng的RNA样品，可以在第一链cDNA合成中使用0.1 μg到0.5 μg乙酰BSA。 6）RNA模板二级结构太多建议解决方法：将RNA和引物在不含盐及缓冲液条件下变性/退火.提高逆转录反应温度，对SuperScriptⅡ可以到50℃，对ThermoScript可以到65℃。注意：不要在＞60℃时使用oligo(dT)引物，选择一个在反应温度可以退火的GSP。对于＞1kb的RT-PCR产物，保持反应温度≤65℃。注意：不要在高于37℃时使用M-MLV。如果不需要全长cDNA，在第一链反应中使用随机引物。 7）引物或模板对残余的RNA模板敏感建议解决方法：在PCR前用RNaseH处理。 8）靶序列在分析的组织中不表达建议解决方法：尝试其他靶序列或组织 9）PCR没有起作用建议解决方法：对两步法RT-PCR，不要在PCR步骤