RT-PCR出现非预期条带是怎么回事？

相关实验：逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR，rtpcr）

偶然回头

2013-02-22

RT-PCR特异性不好，在琼脂糖凝胶分析中观察到非预期条带。有哪些原因？该怎么改善呢？

1 个回答

我是金博士

2013-02-22

有帮助

可能原因：1. 物和模板非特异性退火，建议解决方法：在第一链合成中使用GSP，而不是随机引物或oligo(dT)。试用允许高温cDNA合成的GSP。2. GSP设计较差，建议解决方法：遵循用于扩增引物设计的同样原则。3. RNA中沾染了基因组DNA，建议解决方法：使用扩增级DNaseⅠ处理RNA。使用没有逆转录的对照反应检测DNA污染。

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