如何确定普通反转录 PCR 时 cDNA 的用量？

多谢以上各位！明白了！但是有个内质网应激方面的指标XBP1，文献都是用跑电泳来看splicing形式的多少，就是说扩出来是两种产物，貌似没查到用RT-qPCR的…………

必须要保证cDNA的量要一致才有可比性，所以最好还是做RT-qPCR。之所以要做内参，一是利用△△C法运算得到基因差异，二就是利用内参可看得出你每孔的cDNA模板量是否具有一致性，一般来说，我们实验要求样品内参的Ct值最好相差不要超过0.2~0.5，还有值得注意的是，如果内参Ct值出现过大或者过小都会影响到你的实验数据分析，一般来说内参在Ct值=12~15的位置左右为宜

要保证cDNA的量是一定的。因为内参在不同组表达恒定，所以cDNA恒定，内参就恒定。在这个前提下再去比较目的mRNA。

既然你需要进行这方面的比较，为什么不采用real-time PCR？RT-PCR只能用来定性检测，即大概看看是否多了或者少了，不能进行半定量，更不能进行定量。
另外，如果你非得采用这种方法，模板量是一定要一样的