GST tag的特异性高吗？

提高gst目的蛋白的浓度，二者存在竞争关系，提高浓度就可以提高竞争力

考虑是杂蛋白比例过高导致目的基因结合失败，建议纯化样品后再做

常见原因包括:

1. 目的蛋白表达量低,被竞争性结合的杂蛋白饱和了GST结合位点。可以优化诱导条件,提高目的蛋白表达量。

2. 融合蛋白表达 folding 不正确,GST标签被隐藏,无法与Glutathione癸键。可以在低温条件下表达改善溶解。

3. 目的蛋白与GST融合表达效率低下。可以更换表达载体优化融合蛋白的表达。

4. 裂解液条件不当导致蛋白变性,GST标签丧失活性。可以试试更温和的非变性裂解液。

5. 融合蛋白表达后发生降解,GST标签被切掉。可以加蛋白酶抑制剂避免降解。

6. 采用的洗脱条件过于严苛,导致目的蛋白提前洗脱。可以优化洗脱液成分,减少 Triton X-100用量。

7. 竞争性结合蛋白与GST亲和力更大,占据了Glutathione。可增加珠子量,或先截留此蛋白再纯化目的蛋白。

一般来说,重新优化表达和裂解条件可以提高目的蛋白的纯化效果。也可以考虑更换标签或纯化方法。