【求助】3t3成脂诱导

培养注意事项:

1.培养密度一般控制在40-60%的汇合度，过高的汇合度，细胞可能会开始分化；

2.注意血清类型。一般使用的是新生牛血清培养，用胎牛血清生长速度会加快 ，容易使细胞分化；

3.传代时铺板需均匀，不然会导致分化不均匀，分化比例低。

4.从添加诱导剂开始到分化结束，通常需要8天。一般第6天脂滴就出来了，剩下2天就是脂滴积聚的过程。分化效果好的话，第4天脂滴就出来了；

5.3T3-L1细胞添加诱导剂时，手法要特别轻，尽量用枪头贴壁逐滴加入，让液体慢慢流下，这样对细胞的冲击最小，否则极容易造成细胞卷边飘起；

6.细胞代数越多，成脂能力越弱，需要诱导的时间也就越长，可适当增加地塞米松和胰岛素用量；

7. 实验中所使用的溶剂遵循现用现配的原则。

诱导分化过程:

1.细胞长满以后，接触抑制2天（目的是让细胞退出生长周期）；

图1. 细胞接触抑制

2.加入含有IBMX（使用浓度为0.5mM）、地塞米松（使用浓度为1μmol/L）、胰岛素（使用浓度为1-10μg/mL）的培养液培养2天；

图2. 加诱导培养基1培养

3.再换成只含胰岛素的培养基培养2天；

图3. 加诱导培养基2培养

4.最后换成不含诱导激素的常规培养基培养，每2天换液1次；

图4. 常规培养

5.用油红O染色法鉴定细胞是否诱导成功。