干细胞成骨和成脂诱导方法

一、成骨诱导体系：

1. 试剂

成骨诱导液：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：

地塞米松：通过促进Cbfal mRNA和Osterix mRNA的表达而促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化。

β-甘油磷酸钠：可促进地塞米松对MSC的的诱导分化。

Vc：一种重要的营养素和氧化还原剂，在骨盐代谢及骨形成中具有重要作用。在体外，它能增加钙盐的沉积，促进矿化结节的形成，并通过间充质细胞间接调节破骨细胞的分化。维生素C能直接抑制核因子κB受体活化子配体（RANKL）诱导的破骨细胞形成 。

2. 诱导步骤

（1）待干细胞达到80~90%融合时，消化。

（2）将干细胞接种于六孔板中，每孔约3x103个细胞，加入2ml / 孔干细胞完全培养液。放入37°C，5% CO2孵箱中培养。

（3）24h后，移去旧的培养液，加入2ml孔成骨诱导液。

（4）每三天换液，诱导2-3周。

（5）2-3周后，钙结节形成，进行茜素红染色。

二、成脂诱导体系：

1. 试剂

成脂诱导液A：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛素，IBMX，地塞米松，吲哚美锌。

成脂诱导液B：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛素。

2. 诱导步骤：

（1）待干细胞达到80~90%融合时，消化。

（2）将干细胞接种于六孔板中，每孔约2x104个细胞，加入2ml / 孔干细胞完全培养液。放入37°C，5% CO2孵箱中培养。

（3）每三天进行换液（干细胞完全培养液），直至细胞达到100%融合。

（4）待细胞达到100%融合时，移去旧的培养液，加入2ml / 孔成脂诱导液A开始诱导。

（5）三天后更换成成脂诱导液B进行维持，24h后再更换成成脂诱导液A诱导，如此进行3个循环。

（6）当脂滴出现较多，但比较小时，可以用成脂诱导液B进行维持3-5天，脂滴增大。

（7）油红O染色。

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