请教大家如何检测未表达基因的敲除/敲入效率

引入标记基因序列，便于目的基因的示踪和定位，或引入调控表达元件如增强子，调控目的基因的表达。

在干细胞的A基因座上敲入B基因时，由于A基因在干细胞阶段尚未表达，我们无法通过观察细胞表型的变化来验证B基因是否成功敲入。这时我们需要利用分子生物学技术对细胞进行验证。

一种常用的方法是通过PCR扩增和测序来检测B基因是否成功敲入。我们可以设计一对引物，其中一个引物在B基因序列内，另一个引物在A基因序列内，以此来鉴定是否存在B基因的序列。若PCR产物带有B基因的序列，则说明B基因已经成功敲入A基因座上。此外，还可以使用Southern blot等其他分子生物学方法来验证。

在筛选成功敲入的细胞时，可以考虑采用筛选标记物来实现。例如，可以在B基因序列中加入一个荧光蛋白的编码序列，使得成功敲入的细胞能够表达荧光蛋白，并且通过荧光显微镜来筛选荧光阳性的细胞。此外，也可以采用抗生素抗性基因等筛选标记物来进行筛选。

可以使用PCR验证B基因是否成功敲入了A基因座位。需要设计一对引物，一个在A基因座上，另一个在B基因上，然后进行PCR扩增。如果扩增出了大小与预期相符的片段，则说明B基因已经被成功敲入到A基因座位。

为了筛选出成功敲入的细胞，可以采用一些标记技术，如荧光标记或抗生素抗性标记等。具体可根据实验需要选择相应的标记方法。

最简单的办法就是验证基因的表达产物。