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求问关于质粒转酵母的问题

相关实验:质粒的制备

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dxy_l8w7uvo0

我要分别转两个质粒到酵母中,做了空白对照,转了空载,空载长的好好的,每次转质粒就不长菌是什么原因;另一个质粒阴性对照总是长菌是什么原因,求有经验的小伙伴给点建议

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3 个回答

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huarenqiang5

有帮助

考虑问题出在质粒上,首先需要对质粒进行电泳检测,电泳结果需为大小正确且明亮的条带;其次核对筛选培养基的选用和配制是否正确;排除上述因素,就需要复查酵母菌的外观气味是否正常,或者进行镜检。

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土井挞克树

有帮助

引物的连接是否正常,引物不恰当的话会出现你说的情况

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loveliufudan

有帮助

对于第一个问题,转质粒不长菌的原因可能有以下几个方面:

质粒质量不好:质粒质量不好可能导致转化效率低下,因此可以尝试更换质粒,或者重新制备质粒。

酵母菌株不适合:不同的酵母菌株对质粒的接受能力有所不同,如果使用的酵母菌株对该质粒不敏感,可能会导致转化效率低下,可以尝试更换酵母菌株。

转化条件不好:转化条件包括电穿孔条件、转化液组成、转化时间等等,不同的质粒可能需要不同的转化条件,可以尝试优化转化条件,比如调整电穿孔电压和电容、改变转化液组成、增加转化时间等等。

对于第二个问题,阴性对照总是长菌的原因可能是:

阴性对照有污染:阴性对照可能存在细菌污染,可以重新制备阴性对照,或者通过其他方法检测阴性对照中是否存在污染。

转化液有问题:转化液中可能存在有利于细菌生长的成分,可以重新制备转化液。

转化条件不合适:如果阴性对照总是长菌,可能是转化条件不合适,可以尝试优化转化条件,如调整电穿孔电压和电容、改变转化液组成等等。

综上所述,要提高质粒转化的效率,可以考虑更换质粒、酵母菌株,优化转化条件等方法;对于阴性对照总是长菌的情况,可以重新制备对照,检测转化液中是否存在有利于细菌生长的成分,优化转化条件等。

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