求助 | 质粒保存在-20℃和-80℃会断裂或者消失吗？

派大星吃吃吃

2023-05-06

半年前菌液大提完的一管质粒A分装成两管分别冻存在-20和-80℃，其中-20℃的那管我经常拿出来使用，所以反复冻融比较频繁，最近发现质粒转染的效果不如以前了，我重新送测序和测浓度，发现测序没问题，浓度也没有降低。我就分别从-20和-80都吸出1ug质粒A跑核酸电泳，也拿了同期（半年前）一起大提的其他两种质粒B和C也吸取了1ug做阳性对照（其他两种也冻-20℃，转染效果一直很好），发现不管是反复冻融的-20℃的A还是一直保存在-80℃的A，A条带都比反复冻融的B和C要浅很多，但A B C我都是稀释成1ug/10ul 跑的，请问为什么啊？难道就A质粒容易断裂或者消失吗？

4 个回答

loveliufudan

2023-05-06

有帮助

长期反复冻融会对质粒DNA的完整性造成一定的影响，导致质粒DNA的断裂或降解。此外，即使在-80°C下保存，长期保存也可能会导致质粒DNA的降解。因此，即使质粒A和质粒B、C一样都是在-20°C下保存的，由于经历了不同程度的冻融和保存时间，质粒A的完整性可能已经受到了影响，从而导致转染效果不如以前。建议重新制备新的质粒A，避免反复冻融，并尽量缩短其保存时间，以保证质粒DNA的完整性。

sswei

2023-05-06

有帮助

质粒长期保存-80℃可达5年，4℃保存可达6个月。但是质粒反复冻融，质粒容易降解。尤其是室温较高时，双链DNA会不稳定。

小小小小小芳

2023-05-06

有帮助

把携带质粒的菌种保存于20%的甘油于－80度可长期保存几年，而仅保存质粒零下20度避免反复冻融就可以长期保存了

毛利小五郎的徒弟

2023-05-06

有帮助

保存在负八十不会断裂消失，负二十短期也不会