派大星吃吃吃
半年前菌液大提完的一管质粒A分装成两管分别冻存在-20和-80℃,其中-20℃的那管我经常拿出来使用,所以反复冻融比较频繁,最近发现质粒转染的效果不如以前了,我重新送测序和测浓度,发现测序没问题,浓度也没有降低。我就分别从-20和-80都吸出1ug质粒A跑核酸电泳,也拿了同期(半年前)一起大提的其他两种质粒B和C也吸取了1ug做阳性对照(其他两种也冻-20℃,转染效果一直很好),发现不管是反复冻融的-20℃的A还是一直保存在-80℃的A,A条带都比反复冻融的B和C要浅很多,但A B C我都是稀释成1ug/10ul 跑的,请问为什么啊?难道就A质粒容易断裂或者消失吗?
loveliufudan
长期反复冻融会对质粒DNA的完整性造成一定的影响,导致质粒DNA的断裂或降解。此外,即使在-80°C下保存,长期保存也可能会导致质粒DNA的降解。因此,即使质粒A和质粒B、C一样都是在-20°C下保存的,由于经历了不同程度的冻融和保存时间,质粒A的完整性可能已经受到了影响,从而导致转染效果不如以前。建议重新制备新的质粒A,避免反复冻融,并尽量缩短其保存时间,以保证质粒DNA的完整性。
sswei
质粒长期保存-80℃可达5年,4℃保存可达6个月。但是质粒反复冻融,质粒容易降解。尤其是室温较高时,双链DNA会不稳定。
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把携带质粒的菌种保存于20%的甘油于-80度可长期保存几年,而仅保存质粒零下20度避免反复冻融就可以长期保存了
土井挞克树
保存在负八十不会断裂消失,负二十短期也不会
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