草丛有只大橘
做内源co-IP时,pre-clear过的上清液与抗体过夜孵育,第二天加磁珠时,用的磁珠还需要提前用BSA封闭吗,封闭多久?
我是proteinA/G的磁珠,有些说封闭有些说非特异不是很强就最好不封闭呢?preclear过,还需要用封闭过的磁珠吗?
bamboopiggy
根据你买的磁珠的说明书,我以前用的进口的不用封闭,后来用的国产的,技术就建议我用bsa封闭
balalaLy
我一般是敷抗体的时候,把磁珠也加到bsa中过夜
土井挞克树
最好用BSA封闭,封闭后效果好一些
loveliufudan
对于内源co-IP实验,如果预处理(pre-clearing)过的上清液与抗体过夜孵育,第二天加磁珠时最好使用已经用BSA封闭过的磁珠,以减少非特异性结合。BSA的浓度可以根据具体实验需要来定,一般建议使用1% BSA。封闭时间通常为30分钟至1小时,不需要太长时间。至于是否必须用封闭过的磁珠,这取决于实验的需要和具体情况。如果非特异性结合的情况比较严重,使用封闭过的磁珠可以降低干扰信号的产生,但如果非特异性结合不是很严重,则可以尝试使用未封闭的磁珠。
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