lucy1995
我做IP是proteinA/G磁珠,请问在磁珠洗脱的时候,吸去上清液,加入loadingbuffer的时候,loadingbuffer很少,只有30ul,有些磁珠沾在了管壁上干了,肯定对结果会有影响,这怎么解决呢?
loveliufudan
如果在磁珠洗脱过程中loading buffer的量不足,可能会导致磁珠沾在管壁上,从而影响实验结果。为了解决这个问题,您可以考虑以下几点:
尽量使用足够的loading buffer。如果您的实验方案已经确定,可以根据样品数和洗脱次数计算所需的loading buffer量。如果实验中使用的loading buffer含有比较昂贵的成分,可以考虑自制loading buffer。
在洗脱磁珠时,要注意尽量避免磁珠沾在管壁上。一种解决方法是在洗脱后立即加入足够的loading buffer,这样可以减少磁珠沾在管壁上的机会。另外,在离心磁珠时,可以将离心管倾斜到一个角度,让磁珠尽量集中在管底,然后小心地吸取上清液,避免磁珠沾在管壁上。
如果磁珠已经沾在了管壁上,您可以尝试用PBS等缓冲液轻轻洗涤管壁,将磁珠重新悬浮在缓冲液中。如果这种方法无效,您可以考虑重新洗脱磁珠,并使用更多的loading buffer。
土井挞克树
太干的话可以加入pbs冲洗,有利于洗脱。
sswei
建议使用低吸附率的耗材进行磁珠操作。另外,在缓冲液中添加 0.01%~0.1%(v/v)的非离子型去垢剂(如NP-40、Tween-20或TritonX-100)可以有效降低磁珠对耗材的粘附。
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