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用试剂盒提取蝗虫基因组DNA,提取完之后跑胶,条带不怎么亮,有可能是裂解的时间不够,但是加样孔处很亮,想问一下是什么原因?

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dxy_efuv5i55

制胶用的是0.3g的琼脂糖和30ml的缓冲液,缓冲液是6X TEB Buffers稀释10倍。

加样是是1ul的缓冲液和5ul的DNA混合物(之前是3ul缓冲液+2ulDNA,但是没有条带)

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4 个回答

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sswei

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一般是样品处理或者配胶的时候不注意,混入了一些内切酶,或是电泳温度高,导致核酸降解,尤其是跑rna电泳,很容易这样。

建议用新胶,重新跑一次,样品用醋酸铵重新纯化,电泳槽用缓冲液冲洗多次再用。另外可以在电泳槽周围放冰,降低电泳温度,并适当调低电压,因为高温对核酸降解也有促进作用。

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huarenqiang5

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建议优化体系,重新PCR。

点样孔亮可能是你模板加多了,且模板很大,你的胶浓度又很大,所以模板都堵在样孔处了。

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loveliufudan

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如果您的试剂盒提取蝗虫基因组DNA的条带不够亮,可能是DNA的浓度太低或DNA质量不好导致的。另外,您提到加样孔处很亮,可能是由于加样的DNA浓度比其他样品高。以下是一些可能的解决方法:

重提取样品,确保DNA纯度和浓度符合要求。

使用其他电泳缓冲液和琼脂糖,尝试不同的电泳条件。

尝试使用其他的DNA染料,如SYBR Green I等,来检测DNA条带。

调整加样量,确保样品中的DNA浓度相对均衡。

需要注意的是,琼脂糖的浓度过低或过高都可能导致电泳条带不清晰,因此需要根据实验条件进行适当调整。

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毛利小五郎的徒弟

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裂解时间太多,没有形成趋势条带。

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