蛋白的裂解与提取步骤

这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol，希望对大家有所帮助。

10ml 三去污裂解液配方如下：
50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)： 0.07882g
150 mmol/L NaCl： 0.08775g
0.2 g/L叠氮钠： 0.002g
1 g/LSDS 0.01g
100 mg/L Aprotin 0.001g
10 g/L NP-40 0.1g
5 g/L去氧胆酸钠 0.05g
100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g


总蛋白抽提程序：
1.PBS洗细胞3 次
2.加入裂解缓冲液（1.5x106个细胞大约加入100µL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液），
冰上放置20min
3.收集裂解液
4.离心，12000转，2~10min
5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-80度备用